5.4 Analyses d'immunologie clinique

5.4.1 Connaissances en immunophysiologie

  • Organes, cellules et molécules du système immunitaire
  • Réactions immunes non spécifiques et röactions inflammatoires
  • Röactions immunes spécifiques

5.4.2 Principes méthodologiques de base

    • Immunoprécipitation en phase liquide (néphélémétrie et turbi­dimétrie)
    • Immunoprécipitation en gels
    • Réaction d’agglutination
    • Méthodes hémolytiques
    • Méthodes de séparation et de transfert (électrophorèse, isoelectric focusing, Western-Blotting, Dot Blot)
    • Immunofluorescence indirecte sur cellules et coupes tissulaires
    • Méthodes immunologiques (radio-immuno-essai, enzyme-immuno-essai, fluorescense-immuno-essai, chimiluminicense-immuno-essai, Dot-Blot-immuno-essai, Elispot)
    • Immunophénotypisation par cytométrie en flux
    • Préparation, comptage, stimulation et enrichissement de populations cellulaires, (réalisation de gradient de ficoll, séparation par cytométrie de flux et par billes magnétiques, incorporation de thymidine / CFSE)
    • Analyses sur les acides nucléiques (méthodes d’extraction et d‘amplification (PCR, Real-Time-PCR, autres tests de biologie moléculaire), méthodes enzymatiques, séquencage, Southern-  et Northern-Blot, technique d’hybridation, méthodes de recherche de mutations)

    5.4.3 Principes du diagnostic de laboratoire en immunologie

      • 5.4.3.1 Infections et vaccinations

      • Connaissances de base:

      • Epidémiologie et évolution des infections bactériennes, virales et parasitaires
      • Déroulement de la réponse immune lors d’infections bactériennes ou virales
      • Principe de la vaccination; propriétés des vaccins (vaccination active, passive)
      • Déroulement de la réponse immune post-vaccinale
      • Plannification vaccinale en suisse
      • Techniques spécifiques:
      • Recherche, identification et quantification de virus; méthodes sérologiques et de biologie moléculaires (VIH, hépatites virales A, B, C, D, E)
      • Recherche de bactéries
      • Contrôle de la vaccination
      • 5.4.3.2 Immunodéficiences (primaire et secondaire)
      • Connaissances:
      • Epidémiologie, pathogénèse, pathophysiologie et thérapie des immunodéficiences primaires
      • – Déficiences cellulaires T et B combinées
      • – Carence en anticorps
      • – Maladies liées à un déficit immunitaire
      • – Déficit phagocytaire
      • – Déficit de l’immunité naturelle
      • – Déficit du système du complément
      • – Autres syndromes d’immunodéficience
      • – Immunodéficiences secondaires
      • – Immunodéficience induite par les autoanticorps
      • – Immunodéficience induite par les médicaments
      • – Maladies associées aux immunodéficiences
      • Symptômes principaux et signes précurseurs d’une immunodéficience primaire
      • Algorithmes diagnostiques d’une immunodéficience primaire


      • Techniques spécifiques:
      • Définition des anticorps
      • –     Caractéristiques et quantifications des Ig et des sous-classes Ig
      • –     Spécificité et quantification de la réponse vaccinale
      • Analyse des sous-populations lymphocytaires
      • –     Différenciation morphologique
      • –     Différenciation par immunophénotypisation     
      • Définition des cellules spécifiques d’un antigène
      • Analyse fonctionnelle des lymphocytes
      • –     Production de cytokines
      • –     Activation  et prolifération cellulaire
      • –     Analyses de cytotoxicité
      • Analyse fonctionnelle des granulocytes
      • –     Chemotaxie
      • –     Molécule d’adhésion
      • –     Phagocytose
      • –     Activation intracellulaire
      • Analyse de la réponse immune non-spécifique
      • –     Caractérisation et quantification des facteurs du complément 
      • –     Définition fonctionnelle du système du complément (voies classique, alterne et lectine)
      • –     Régulation du système du complément (C1-inactivateur/inhibiteur, facteur néphritique C3, CD55, CD59)
      • Analyse génétique des déficits immunitaires primaires
      • 5.4.3.3  Maladies autoimmunes
      • Connaissances:

      • Epidémiologie, pathogénèse, pathophysiologie et thérapie de:
      • –     Maladies autoimmunes systémiques PR, collagénoses, vasculites, syndrome des anti-phospholipides)
      • –     Maladies autoimmunes spécifiques des organes (foie, estomac, dermatologique, endocrinienne, neurologique, rénale )
      • –     Maladies inflammatoires (pathologies intestinales (MICI), pathologies pulmonaires)
      • Tolérance immunologique


      • Techniques spécifiques:
      • –     Autoanticorps et maladies autoimmunes systémiques et spécifiques d’organes
      • –     Autoanticorps et maladies paranéoplasiques
      • –     Dosage du complément et maladies
      • –     Détection et définition des immunglobulines  et des cryoglobulines
      • –     Typisation HLA et maladies autoimmunes
      • –     Cytokines, molécules d’adhésion et récepteurs


      5.4.3.4  Maladies allergiques
      • Connaissances:
      • Epidémiologie, pathogénèse, pathophysiologie et thérapie de
      • –     Hypersensibilité allergique et non allergique (IgE et non-IgE médiée)
      • –     Réactions d‘hypersensibilités (Types  I, II, III, IV)
      • –     Eczéma atopique , asthme allergique et non allergique , rhinite, conjonctivite urticaire, hypersensibilité médicamenteuse, allergies alimentaires, alvéolite exogène allergique
      • Extraction, purification et composition des allergènes
      • Réactions croisées des anticorps
      • Test cutané (Prick et Intradermal)
      • Immunothérapie spécifique (désensibilisation)

       

      • Techniques spécifiques:
      • –     Analyse quantitative de l’IgE totale
      • –     Détection des IgE spécifiques (anti-allergènes et composants moléculaires)
      • –     Détection des IgG spécifiques (précipitines)
      • –     Analyse des médiateurs libérés par les mastocytes et les éosinophiles (tryptase, ECP)
      • –     Analyse in vitro de l’activation et de la dégranulation des basophiles
      • –     Analyse in vitro de l’activation et de la prolifération des lymphocytes



      • 5.4.3.5  Myélomes multiples et autres dyscrasies lymphoplasmocytaires
      • Connaissances:
      • Epidémiologie, pathogénèse, pathophysiologie de
      • –     Leucémies
      • –     Lymphomes
      • –     Myélomes
      • –     Thérapie avec les cellules souches (greffe autologue versus hétérologue)


      • Techniques spécifiques:

      • Recherche de gammapathies polyclonales, oligoclonales et monoclonales par électrophorèse, immunofixation, immunosoustraction
      • Dosage quantitatif de chaînes légères libres


      5.4.3.6  Immunologie de transplantation
      • Connaissances:
      • Pathophysiologie et thérapie en cas de
      • –      Transplantation d’organes solides (rein, foie, coeur, poumon)
      • - Réaction de rejet aigü et chronique (humoral et cellulaire)
      •                   - Typisation HLA et recherche d’anticorps anti-HLA
      • –     Transplantation hématopoiétique
      •                  - Transplantation de moelle osseuse et de cellules souches
      •                   - Mobilisation des cellules souches
      •                   - Greffe autologue / hétérologue
      •                   - Maladie du greffon contre hôte (Graft-versus-Host Disease,GvHD,)
      •                   - Graft-versus-Malignancy
      • –     Réactions transfusionnelles
      • Procédé et déroulement selon organe et pour la transplantation de moelle (matching HLA, recherche familiale), organisation (centres de transplantation, LNRH, swisstransplant, Eurotransplant, EFI)

      • Techniques spécifiques:
      • Réaction croisée (Crossmatch); cytotoxicité dépendante du complément (CDC), amalyse sur phase solide (SPA, Luminex), cytométrie en flux
      • Typisation HLA (méthodes sérologiques et par biologie moléculaire)
      • Recherche d’anticorps anti-HLA (panel reactive antibody PRA, analyse sur phase solide (SPA, Luminex)
      • Anticorps anti-thrombocytes et anti-érythrocytes

       

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